Reino
Fungi
El Reino Fungi es el grupo formado por los hongos.
Los hongos son organismos:
- Eucarióticos: constituidos por células que poseen orgánulos membranosos y
núcleo rodeado por membrana.
- Heterótrofos: no pueden fotosintetizar por carecer de clorofila y, por lo
tanto, deben utilizar el carbono de los compuestos orgánicos.
- Que se nutren por absorción:
es decir sólo son capaces de incorporar nutrientes simples solubles
(poseen digestión enzimática externa).
- Que presentan una pared
celular rígida: en la mayoría de los casos, la quitina es el
componente cuantitativamente más importante.
- Que poseen células uninucleadas
o multinucleadas.
Se acepta que la palabra hongo deriva del griego: mikes
y del plural latino: fungi.
El término incluye una gran variedad de tipos celulares con
diferentes formas, simples o complejos, móviles o inmóviles, macroscópicos o
microscópicos, todo lo cual ha dificultado su definición.
Clasificación
actual del Reino Fungi:
- Quitridiomicetes
- Zigomicetes
- Glomeromicetes
- Basidiomicetes
-
Ascomycetes
Constituyen uno de los grupos de organismos más
importantes para la vida del hombre, ya que son los responsables de gran parte
de la descomposición de la materia orgánica aumentando su disponibilidad en el
suelo; pueden ser comestibles, venenosos, algunos son patógenos; otros,
producen ciertas sustancias beneficiosas o intervienen en procesos de
elaboración de algunos comestibles.
Composición
química de los hongos
Los hongos al igual que otros seres vivos, están compuestos
fundamentalmente por agua, hidratos de carbono, lípidos y proteínas, los que
varían en calidad según el tipo de célula fúngica que se trate
Morfología
y estructura
Los hongos presentan una morfología muy variada.
La única célula o el conjunto de células que los constituyen
se denomina talo (del griego thalos:
germen).
En la naturaleza pueden encontrarse formas muy simples como
las levaduras, formas filamentosas multinucleadas y estructuras macroscópicas
más complejas como los denominados hongos de sombrero.
Levaduras:
son hongos unicelulares. Pueden ser esféricas, ovoides, elípticas, cilíndricas
o muy alargadas. Sus dimensiones varían entre 3 y 10 um de ancho por 5 a 30 um
de largo. La mayoría de las veces se encuentran aisladas. En algunos casos
permanecen unidas sin separarse del todo formando pseudohifas, cuyo entrecruzamiento constituye el pseudomicelio.
Hongos
filamentosos: están constituidos por un conjunto de
filamentos llamados hifas, cuyo
entrecruzamiento constituye el micelio.
Las hifas son más resistentes a los efectos mecánicos que las pseudohifas.
Estas están constituidas por células unidas muy débilmente.
Hongos de
sombrero: presentan una estructura subterránea
formada por la ramificación y el entrecruzamiento de las hifas del micelio. A
partir de éste se desarrolla un conjunto de hifas áereas ramificadas que
aumentan de tamaño y se diferencian dando lugar a la formación de un cuerpo
denominado seta. Entre ellos se
encuentran los hongos comestibles.
La
Hifa
Es un tubo de pared rígida que contiene masa citoplasmática
y muchos núcleos. Presenta ramificaciones laterales y su extremo tiene forma de
uso. El crecimiento de las hifas es, en la mayoría de los casos,
apical. También existen ramificaciones.
El diámetro de la hifa es prácticamente constante
(comúnmente entre 3 y 12 u). El largo es variable (puede medir varios
centímetros o metros)
Las hifas pueden poseer septos a intervalos regulares o
carecer de ellos:
- Cuando un hongo presenta hifas no septadas se dice que su micelio
es cenocítico. El concepto
cenocítico implica la existencia de numerosos núcleos en un citoplasma
común.
- En los hongos con hifas septadas,
la existencia de un fino poro en cada septo y de corrientes
citoplasmáticas permite la circulación de citoplasma y, en algunos casos,
de los núcleos a lo largo de la hifa. Por ese motivo este tipo de micelio
también debe considerarse cenocítico.
Los septos son claramente visibles al microscopio óptico y
son una ayuda importante para identificar grupos fúngicos.
En muchas oportunidades pueden formarse septos completos o
cerrados, cuando por ejemplo el hongo necesita aislar una zona dañada en la
hifa o cuando va a llevar a cabo su reproducción.
La estructura de la hifa responde en términos generales, a
la de una célula eucariótica.
Posee una pared
celular (fundamentalmente formada por quitina, pero en levaduras se
presentan celulosa y glucanos). Posee septos
(de quitina, cada septo se encuentra asociado a un cuerpo de Woronin, que son proteínas rodeadas de una membrana y
actuarían como tapones de los poros de los septos para aislar compartimentos de
la hifa cuando éstas envejecen o cuando se reproducen. Posee membrana citoplasmática, citoplasma con organelas subcelulares,
y varios núcleos.
El
micelio
Según su función, el micelio de los hongos se diferencia en:
-
Micelio
vegetativo: está constituido por las hifas
que crecen dentro y sobre el sustrato que contiene los nutrientes. Cumple
funciones de absorción.
-
Micelio
aéreo o de reproducción: está constituido por
estructuras aéreas que se originan a partir del micelio vegetativo y, como su
nombre lo indica, cumple funciones relacionadas con la reproducción y
multiplicación.
v Micelio
vegetativo:
Las hifas de algunos hongos filamentosos, entre los que se
encuentran los de importancia clínica, originan determinadas estructuras que
son útiles para su identificación.
De acuerdo al aspecto que presentan, se les ha asignado
distintas denominaciones:
- Hifas espiraladas: hifas que asemejan
un espiral de un ´”sacacorchos”. Comúnmente se observan en cultivos
vellosos y viejos de hongos dermatofitos.
- Órganos nodulares: hifas retorcidas en
forma apretada, como si se tratara de nudos.
- Hifas en raqueta: hifas que presentan
regularmente ensanchamientos en forma de clavas, semejando raquetas de
tenis dispuestas una a continuación de las otra.
- Cuerpos pectinados: hifas con
proyecciones unilaterales cortas e irregulares, con la apariencia de un
peine roto.
- Hifas peridiales: hifas anchas,
multiseptadas, semejantes a la columna vertebral y que pueden terminar en
un espiral.
- Rizoides: hifas especializadas del
micelio vegetativo que se sumergen en el sustrato. Semejan raicillas y
cumplen funciones de absorción.
- Estolones: hifas vegetativas aéreas
ligeramente curvadas que se extienden horizontalmente sobre el sustrato,
facilitando la rápida invasión de éste.
- Sinema: es una agrupación de hifas fértiles, relativamente
largas, que semejan un haz o cuerda. En algunos casos son visibles a
simple vista.
- Esporodoquio: es una agrupación de hifas fértiles, relativamente
cortas que se disponen en forma apretada sobre el micelio que le sirve de
base a manera de colchón.
- Esclerocio: cuerpo globular de
aproximadamente 1 mm de diámetro, producido por entrelazamiento de las
hifas del micelio vegetativo, que se recubren con una corteza, sumamente
resistente. Generalmente son pigmentados y se los considera elementos de
resistencia, capaces de conservar la especie en el tiempo.
v Micelio
de reproducción:
Los hongos se diseminan a través de propágalos de dispersión. Entendiéndose como tales cualquier
fragmento de micelio viable o unidades de reproducción que contienen la
información genética necesaria para el desarrollo del hongo. Las esporas son
usualmente dispersas por el viento, el agua, insectos u otros animales, y
proporcionan al hongo poder establecerse en nuevos hábitat.
Las unidades de reproducción presentan distinto origen,
forma, tamaño y color.
Pueden originarse a partir de un proceso asexual o sexual:
- Las que son de origen asexual pueden ser internas
(dentro de células denominadas esporangios), y éstas se denominan esporas, o externas denominadas conidias. Estas esporas asexuales se producen varias veces al año y
en gran cantidad cuando las condiciones ambientales son favorables y los
nutrientes están libremente disponibles. Luego de ser producidas, estas esporas
son capaces de germinar inmediatamente después de ser liberadas y sirven para
que el hongo se disemine.
Las principales unidades de reproducción asexual son:
- Esporangiosporas: se forman de dentro de una célula fúngica modificada a modo de
saco cerrado denominado esporangio,
el que a su vez está sostenido por una hifa especializada, larga, delgada,
simple o ramificada y que se conoce como esporangióforo. El esporangióforo en su porción Terminal da
origen a la columela. Tanto la
morfología del esporangio, de la columela y de las espororangiosporas, como
sus colores, aspectos de sus paredes, etc, son elementos útiles para la
identificación de los hongos capaces de producirlas:
-
Las esporangiosporas
móviles se denominan zoosporas, y
son móviles por uno o dos flagelos.
-
Las esporangiosporas
inmóviles se denominan aplanosporas,
y carecen de flagelos.
- Conidias: no se originan dentro de esporangios. Pueden formarse
directamente a lo largo de la hifa o a partir de hifas fértiles
denominadas conidióforos:
-
Artroconidias: son
conidias que se forman por transformación de las hifas que luego se fragmentan
en la zona de los septos. Cuando maduran, pueden observarse como células con
paredes gruesas de formas cuadradas, rectangulares o en barril.
-
Clamidoconidias: se
forman, al igual que las artroconidias, por transformación de las hifas. Pueden
ser intercalares, cuando están incluidas en las hifas, o terminales cuando se
forman en el extremo de éstas.
-
Blastoconidias: son
conidias que se forman por gemación (brotación) a partir de una célula madre.
-
Microconidias: son
conidias muy pequeñas, usualmente unicelulares. Pueden tener distinta
morfología.
-
Macroconidias: conidias de
mayor tamaño, de paredes gruesas y habitualmente multicelulares. En general
tienen forma de huso o de clavas y pueden presentar paredes lisas o rugosas.
Nota:
Los términos microconidias y macroconidias se aplican a aquellos hongos que son
capaces de producir conidias de tamaños diferentes.
Cuando el
hongo sólo produce un tipo de conidia a ésta se la llama simplemente conidia.
Las
unidades de reproducción de origen sexual se denominan en general
esporas. Usualmente se producen ante condiciones ambientales adversas tal como
temperaturas extremas ó el agotamiento de agua ó nutrientes. Por ello es que
las esporas sexuales exhiben adaptaciones tales como espesor de sus paredes
celulares, reserva de lípidos y carbohidratos y mecanismo de letargo, que las
habilitan para permanecer vivas hasta que las condiciones sean favorables. Las
distintas morfologías de las esporas sexuales y las formas de producirse son
los criterios más importantes que se tienen en cuenta para clasificar los
hongos:
-
oosporas
-
zigosporas
-
basidiosporas
-
ascosporas
Pleomorfismo
Se dice que un hongo es pleomórfico cuando posee la propiedad
de presentarse en dos o más formas. El dimorfismo
(micelio-levadura) es un tipo especial de pleomorfismo que tienen algunos
hongos patógenos. Éstos pueden cambiar de forma miceliar a levaduriforme y
viceversa en respuesta a algún factor. Por ejemplo: los hongos que parasitan al
hombre y otros animales de sangre caliente y que causan micosis profundas a
menudo cambian de forma miceliar a levaduriforme cuando la temperatura se eleva
de 20-25 ºC a 37ºC. Lamentablemente no existe una respuesta única que explique
el dimorfismo, ya que el mecanismo bioquímico que justifica el fenómeno para un
hongo no es aplicable para otros.
Nutrición
como una base para el estudio de los hongos
El modo en que los hongos obtienen nutrientes del medio
ambiente los diferencia de las plantas y animales, y es en gran parte
responsable de su hábitat de crecimiento. Los hongos no tienen clorofila y por
ello no son capaces de usar la energía radiante del sol para producir moléculas
orgánicas como lo hacen las plantas. En términos de su modo de nutrición los
hongos son similares a los animales en su vida heterotrófica: ellos tienen que
obtener sustancias orgánicas (alimento) preformadas del medio ambiente. Los
animales, sin embargo, hacen uso de una boca para ingerir alimento que es luego
digerido internamente; los hongos digieren su alimento externamente por
liberación de enzimas hidrolíticas dentro de sus alrededores inmediatos. Estas
enzimas rompen hacia abajo el sustrato en pequeñas subunidades, que luego son
absorbidas por el hongo.
Este modo de nutrición por absorción es una de las bases por
las que Whittaker (en 1969), colocó a todos los hongos en un reino propio, el
Reino Fungi. En este reino, son agrupados todos aquellos organismos
multicelulares eucariotas que obtienen nutrientes por absorción al contrario
que por fotosíntesis 8Reino Plantas) ó ingestión (Reino Animal). Por ello es
enorme la variedad de sustancias orgánicas que los hongos pueden usar como
fuente de energía. Sin embargo algunas especies son bastante selectivas en sus
requerimientos nutricionales y se desarrollan sólo en ciertos sustratos.
Hay tres criterios que se tienen que cumplir para que un
hongo pueda utilizar cierto sustrato:
1). El hongo debe ser capaz de sintetizar y secretar las
enzimas necesarias para degradar el sustrato en moléculas pequeñas.
2). El hongo debe tener mecanismos necesarios para realizar
el transporte de estas pequeñas moléculas hacia el interior de las células.
3). El hongo debe poseer dentro de las células la maquinaria
metabólica necesaria para convertir estas moléculas en energía y en bloques
estructurales para el crecimiento y desarrollo.
Así un hongo puede sufrir hambre en el medio de abundancia
si le falta una enzima requerida para la hidrólisis, realización ó el
metabolismo de un sustrato particular.
Hábitat:
-
Saprófitos:
viven sobre materia orgánica muerta originados de plantas o animales. Ésto es
beneficioso porque los hongos degradan dichos materiales, y así los nutrientes
son reciclados en la biósfera para luego ser usados por otros organismos, por
ejemplo el “Champiñón”. Pero también puede ser perjudicial para el hombre en el
caso de la “podredumbre” de los alimentos, madera, enmohecimiento de la ropa,
etc.
-
Saprófitos
especializados: viven en el suelo y pueden
entrar en el huésped y se convierten en parásitos.
-
Parásitos:
poseen enzimas necesarias para obtener nutrientes directamente de organismos
vivos. Son variados los grados de parasitismo.
-
Pertrófilo:
entra en el huésped, le causa la muerte y luego lo parasita.
En algunas instancias la absorción de nutrientes por el
hongo del organismo hospedador no es perjudicial y puede igualmente ser
beneficioso para el hospedador. Este tipo de relaciones simbióticas son
establecidas en asociaciones entre hongos y algas en un líquen, y entre hongos y la raíz de una planta vascular en micorrizas.
Otros hongos parásitos causan daños significantes en el
hospedador y son entonces llamados patógenos.
Metabolitos
fúngicos de importancia para la salud humana
Algunos de estos productos tienen un inmenso valor
comercial: es el caso de los antibióticos (por ej. penicilinas). Otros en
cambio son extremadamente tóxicos para el hombre y los animales, siendo
peligrosos para el medio ambiente (por ej. el hongo Claviceps purpurea
que produce esclerotes en los granos de cereal y pasturas produciendo muerte
cuando dichos granos contaminados son ingeridos). Otros hongos cuando crecen
como contaminantes de productos alimenticios almacenados, producen micotoxinas
que son extremadamente potentes (por ej. Aspergillus spp
producen aflatoxinas y ocratoxinas, y
algunos Fusarium spp producen zearalenona y
tricotecenos)
Según Lynn Margulis, un hongo es un organismos eucariontes, heterótrofo no fotosintético, formador de esporas y que carece de movimiento (es
amastigote) en todas las fases de su ciclo de vida; sus paredes celulares están
formadas de celulosa y/o quitina y absorben su alimento por digestión
enzimática externa.
Antiguamente, Whittaker
(Investigador gringo que fundó el sistema de los cinco reinos, reconociendo el
reino de los hongos) consideraba a los hongos simplemente como organismos
eucariontes, heterótrofos nunca fotosintéticos, productores de esporas con
nutrición absorbente. A raíz de la reorganización de este reino por Lynn
Margulis y K. Shuartz (definición de arriba), varios grupos que antes eran
considerados como hongos fueron reorganizados y enviados como miembros de otros
reinos:
Grupo
|
Reino (según Margulis)
|
|
Actinomycetes
|
Procarionte
|
|
Mixobacterias
|
||
Mixomycetes
|
Protoctistas
|
|
Acrasiomycetes
|
||
Laberintulomycetes
|
||
Hiphochytridiomycetes
|
||
Plasmodiomycetes
|
||
Chitridiomycetes
|
||
Oomycetes
|
||
Zigomycetes
|
Fungi
|
|
Ascomycetes
|
||
Basidiomycetes
|
||
Deuteromycetes
|
||
Micoficofitos
|
Historia
de la micología
Nicander, 185 a.c. Escribe su libro
"Alexis farmaca" donde dice que los hongos se originan del suelo por
acción de la lluvia. Esto constituye la primera referencia de la micología.
Ovidio, 43 a.c. "Metamorfosis";
Plinio 23-79 a.c. "Naturale historia"; Juvenal, 60-140 d.c.
"Satire; Plutarco 46-120 d.c.; todos ellos hacían referencia al desarrollo
de los hongos por acción de los truenos durante la lluvia.
Lowy, 1968. Encontró que los indígenas de
guatemala asociaban a Amanita
muscaria con los truenos.
Wason, 1968 Encontró que en el Rig Veda
Parjana indú, relacionaban al trueno como padre del soma y éste a Amanita muscaria.
Andrea Cesalpino, 1583. Afirmaba que los
hongos eran "seres intermedios entre las plantas y los animales".
Hooke, 1665. "Los hongos son seres
inferiores".
Tournefort, 1707. Observó que el micelio se
origina de partículas o granos.
Marchant, 1711. Observó y dibujó los
"granos" (esporas) del hongo Xylaria (ascomicete).
Luigi Fernando, 1714. Se dió cuenta que
"los hongos eran producto de la descomposición y el micelio es la materia
intermediaria entre la materia en descomposición y el cuerpo fructífero".
Piere Antonio Michelli, 1729. Funda la micología con su libro
"Nova Plantarum Genera" donde dice que los hongos no son plantas ni
animales, son un grupo aparte. Inoculó esporas en un medio por él preparado y
obtuvo hongos.
El talo
fúngico
El talo (del gr.thallós,
vástago) es el nombre que se le da al cuerpo vegetativo o soma de un hongo.
Existen diversos tipos de talo, aunque el más común sea el de tipo micelial.
Tipos
de talo fúngico
|
|||||
Unicelular:
|
Cuerpo formado por una sola
célula y su núcleo.
|
||||
Pseudoplasmodial:
|
Talo formado por mixamibas que se unen pero sin
perder su individualidad.
|
||||
Plasmodial:
|
Talo formado por mixamibas que se unen y
pierden su individualidad
|
||||
Pseudo micelial:
|
Talo formado por cadenas de células unidas en
sus extremos que forman un "micelio" corto.
|
||||
Micelial:
|
Talo formado por filamentos tubulares
microscópicos llamados hifas. Existen dos tipos de hifa:
|
Por lo general, el talo fúngico no está diferenciado, sin embargo, durante la reproducción generalmente se dá alguna diferenciación. Algunas de estas diferenciaciones pueden ser:
Diferenciación
del talo fúngico
|
|
Rizoide:
|
Prolongaciones hifales cortas
que sirven para fijar el micelio al sustrato y para la absorción
|
Rizomorfo:
|
Estructura parecida a la raíz.
Es un cordón miceliano grueso y resistente constituido por parénquima
|
Estolón:
|
Hifas generalmente horizontales que unen grupos
de rizoides.
|
Haustorio:
|
Hifa que sirve para aumentar la superficie de
absorción dentro de una célula invadida
|
||||
Esclerocio:
|
Estructura dura, resistente a
las condiciones desfavorables. Se forma por la agrupación masiva de micelio y
cuyo exterior se endurece con una corteza quitinizada.
| ||||
Cuerpo fructífero:
|
Estructura multicelular en la
que se forman las esporas. Constituido por plecténquima.
|
||||
Plecténquima:
|
Nombre que se le dá a los dos
tipos de "tejido fúnjico"
|
LEVADURAS
v MICROORGANISMOS UNICELULARES,
HETERÓTROFOS (APROVECHAN LA ENERGÍA DE
MOLÉCULAS ORGÁNICAS MUY REDUCIDAS, RICAS
EN ENERGÍA, QUE OBTIENEN DE SU ENTORNO)
v TIENEN PARED CELULAR RÍGIDA
v TIENEN UN NÚCLEO BIEN ORGANIZADO, CON
MEMBRANA NUCLEAR (EUCARIÓTICO)
v CARECEN DE LOCOMOCIÓN
v POR ESTAS CARACTERÍSTICAS LAS LEVADURAS
PERTENECEN A LOS HONGOS, LOS CUALES DEBEN
TRATARSE COMO REINO SEPARADO, EN EL
DOMINIO Eucarya Y EN LA DIVISIÓN Eumycota
vLAS LEVADURAS (ESPECIALMENTE LAS QUE
ESTÁN INCLUIDAS DENTRO DE LA CLASE
Ascomycetes) HAN SIDO AMPLIAMENTE
RECONOCIDAS COMO EL ORGANISMO
EUCARIOTA IDEAL PARA HACER ESTUDIOS
GENÉTICOS POR SUS PROPIEDADES:
v FASE VEGETATIVA HAPLOIDE Y DIPLOIDE
v ALTA VELOCIDAD DE CRECIMIENTO
v HABILIDAD PARA FORMAR CLONES A PARTIR DE
UNA SOLA CÉLULA
LAS PRIMERAS INVESTIGACIONES GENÉTICAS REALIZADAS EN CEPAS DE LEVADURAS USADAS EN LA INDUSTRIA HAN LOGRADO (entre otros):
1.Identificar genes que controlan el comportamiento de las levaduras en determinados medios (floculación, temperatura de crecimiento, producción de enzimas, etc)
2.Elucidar el número de genes que ejercen el control genético de ciertos procesos metabólicos (asimilación y/o fermentación de hidratos de carbono)
3.Producir nuevas cepas mejoradas a través de programas de mejoramiento genético (como sucede en algunos cultivos agrícolas)
PRINCIPALES DIFERENCIAS ENTRE Prokaryotes Y Eukaryotes
Eukaryotes
|
Prokaryotes
|
Núcleo bien organizado con membrana nuclear
|
No tienen membrana alrededor del DNA celular
|
Mitosis
|
No realizan mitosis
|
Meiosis
|
No realizan meiosis
|
Muchos sistemas de membranas internos
|
Pocos sistemas de membranas internos
|
Citoplasma
|
No tienen citoplasma
|
Mitocondrias
|
No tienen mitocondrias
|
Algunos poseen cloroplastos
|
No tienen cloroplastos
|
TRES CLASES DE HONGOS INCLUYEN A LAS LEVADURAS
Ascomycetes
Basidiomycetes
(Hongos imperfectos)
Ascomycetes: Estructuras sexuales internas, ascos y ascosporos. Célula diploide meiosis cuatro a ocho esporos haploides dentro del asco
Dentro de estas están en su mayoría las de importancia industrial:
Saccharomyces
Kluyveromyces
Pichia
Zygosaccharomyces
Pachysolen
Lipomyces
Debariomyces
Torulaspora
Basidiomycetes: Estructuras sexuales externas, basidiosporos que se forman sobre estructuras llamadas basidios
Rhodotorula
Phaffia
Kloeckera
Hongos imperfectos
Candida
Cryptococcus
Geotrichum
AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE LEVADURAS
Toma de muestras
* Las muestras se deben tomar en frascos estériles y de
acuerdo al origen de las mismas:
* Siembra directa en medios de cultivos sólidos (YM-agar)
acidificado (pH 3.7 – 3.8) + soluciones de antibióticos +
sustancias antifúngicas (ej. rosa de bengala)
* Siembra en medios líquidos para enriquecer las muestras
(glucosa + extracto de levadura) placas de Petri
(YM-agar + soluciones de antibióticos)
PRUEBAS FISIOLÓGICAS
1) DBB (Reacción de color con Diazonium Blue B)
Se utiliza para determinar si los aislamientos son ascomycetes o basidiomycetes. Los basidiomycetes dan un color rojo oscuro y los ascomycetes dan negativo.
Las colonias se resuspenden en KOH (lisis alcalina), se lavan con etanol y al pellet se le agrega la solución de DBB en buffer Tris,
pH 7
pH 7
IDENTIFICACIÓN MOLECULAR
Genes del ARN ribosomal
La estructura y disposición de los genes ARNr es común para la mayoría de los eucariotas
La comparación entre ARNr y su molde ADNr se usa para estudiar relaciones entre especies genéticamente relacionadas y entre especies hermanas
Algunas secuencias de ARNr/ADNr son conservadas y homólogas en la gran mayoría de los organismos. Estas secuencias sirven como punto de referencia de las menos conservadas o hipervariables, que se usan para medir relaciones evolutivas estrechas
* ARNr 18S - subunidad menor de aproximadamente 1.800 pb –
* ARNr 28S (25S a 28S) - subunidad mayor de aproximadamente 3.200 pb –
* ARNr 5,8S de aproximadamente 160 pb,
Estos genes están localizados en una única región genómica repetida en tándem 100 a 200 veces.
Uso de los espaciadores transcriptos internos (ITS)
Aunque el análisis de secuencias del gen ARNr 18S ofrece aportes importantes a la sistemática de levaduras, el alto nivel de conservación de la molécula puede disminuir el aporte para resolver la filogenia de muchos géneros de levaduras
Los ARNr se encuentran en la misma unidad transcripcional, separados por espaciadores transcriptos internos (ITS), de longitud variable que depende de cada especie
ITS1: está ubicado entre los genes ARNr de la subunidad menor y 5,8S.
ITS2: está contiguo al gen ARNr 5,8S que lo separa del gen ARNr de la subunidad mayor.
Primers
El primer ITS1, se encuentra en el dominio conservado 3´ de la secuencia del gen ARNr 18S o subunidad menor.
El primer ITS3 está ubicado a 25 pb del extremo 5´ del gen ARNr 5,8S.
El primer ITS4 es la secuencia reversa de una región conservada en el extremo 5´ del gen ARNr 26S o subunidad mayor.
Primers NL-1 y NL-4
La secuencia de estos primers proviene del dominio divergente D1/D2 (nucleótidos 63 – 642 para S. cerevisiae) en el extremo 5`del ADNr de la subunidad mayor (28S)
El fragmento tiene un tamaño aproximado de 600 pb
Se realizan luego las reacciones de PCR para la amplificación de los fragmentos ITS1 – ITS4 y NL-1 – NL-4
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